在现代医疗保健领域，提高效率和便捷性是创新的主要推动力。在新冠疫情期间，诊断行业内凸显出与效率有关的一系列挑战，包括周转时间、检测能力的限制、供应链短缺和资源短缺。

 

对传染性疾病的控制很大程度上依赖于对大量人群进行筛查的能力，但这也造成了后勤工作的复杂性、资源限制以及对医疗保健服务和人员进行有效协调的需求。

    呼 吸 道 传 染 病 分 子 检 测

 

鼻咽拭子通常被认为是呼吸道病毒检出率最高的样本类型，在常规临床实践和许多呼吸道病毒监测研究中经常作为唯*一的样本类型¹。

但是，鼻咽拭子的瓶颈是它需要经过专业训练的人员操作采集。相比之下，唾液样本可通过非侵入性手法自行采集，避免了健康人群与感染患者接触，减少等待时间，并无需个人防护设备即可操作。研究表明，唾液是一种适合多种疾病诊断的样本，包括性传染病²，热带传染病和呼吸道传染病³。

 

但是，唾液中存在多种PCR抑制物，且其中的DNA/RNA含量相对于其他类型样本如鼻咽拭子和血液来说通常较低⁴。这对于开发灵敏的诊断检测，尤其是直接检测，是一个很大的挑战。

 

随着对更易操作、成本更低且反应速度更快的检测要求越来越高，使用原始样本无需DNA或RNA提取的分子检测技术将越来越受欢迎。

 

结合了无创采集唾液样本和直接检测于一体的方法是新一代筛查检测的理想方案。同时，检测性能不受影响，灵敏度和可靠性要和目前检测方法相似才能达到用户的希望值。

 

 

使用Specimen-specific™ 特定样本类型唾液直扩预混液检测

 

迈迪安最*新推出的Specimen-Specific™ 唾液直扩预混液，可以突破在开发唾液直接检测时遇到的挑战，是专门用于对唾液原始样本灵敏可靠的检测优化的配方。

 

这种即用型的预混液，使用时只需要添加特异性引物和探针即可。此外，它们还可以通过冻干或风干，用于开发常温稳定的检测，是POC检测的理想选择。

唾液分子检测性 能 测 试

 

了评估迈迪安唾液直扩预混液的性能，某家诊断企业进行了一系列检测，将Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）和Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）与参照试剂进行了性能对比。

 

这些预混液分别用来对唾液的粗裂解液和提取的核酸样本中的SARS-CoV-2和流感病毒RNA靶标进行扩增。

 

检测数据显示，迈迪安的唾液直扩预混液具有更优的性能，比通用型预混液有更强的抗抑性，实现更高的检测灵敏度，即使在干燥后常温存放的条件下。

 

研究1. 使用唾液特异性预混液检测唾液中的SARS-CoV-2显示更强的抗抑性

• 目标

 

比较Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）、Air-Dryable™ 可风干一步法 RT-qPCR预混液（MDX095）及对比试剂在多重检测中检测SARS-CoV-2 RNA的性能（FAM：ORF1ab，ROX:N蛋白, Cy5:GAPDH内参）。

 

新冠患者体内提取的唾液经RNA提取或粗裂解处理样本，取半数组织培养感染剂量（TCID50）为1000拷贝/毫升为模板进行扩增。

• 方法

 

从SARS-CoV-2病毒感染患者体内提取的唾液样本经过RNA 提取或简单裂解液处理（50 μL 唾液样本加入 50 μL裂解液后在95°C加热5分钟，经过11,000 rpm 涡旋1分钟取上清液）。

 

qPCR反应设置：5 μL，4x 预混液（MDX131，MDX095或对比试剂），1 μL引物探针混合物 4 μL DEPC 水及 5 μL提取的RNA模板或粗裂解液。qPCR扩增设置：逆转录 55°C x 10分钟，95°C x 3分钟，（95°C x 10秒，60°Cx45秒，69°Cx20秒）x46个循环。

 

• 结果

 

对提取的RNA和唾液粗裂解液样本的扩增中，Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）的Ct值比Air-Dryable™可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）和对比试剂更提前。

 

这表明MDX131对唾液中存在的抑制物，包括提取的RNA中残留的抑制物，比其他预混液有更强的耐受能力。无论是直接扩增还是扩增还是提取的RNA，MDX131是超灵敏唾液POC检测的理想选择。

 

研究2.使用唾液特异性预混液检测唾液中的乙流病毒显示更快速的扩增性能

• 目标

 

比较Air-Dryable™ 唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）与Air-Dryable™ 一步法RT-qPCR预混液（MDX095）风干和液体体系对唾液样本中Flu B的扩增。

 

• 方法

FluB样本或采用磁珠法提取RNA，或分别使用不同缓冲液处理得到集中粗裂解液样本。然后这些样本快速涡旋娶上清液，用健康的人体唾液将Flu B样本稀释至10³或10⁴倍（见表1）。样本通过标准循环或者快速循环进行扩增。

 

表1. 分别使用Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）和Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）对人体唾液样本中的Flu B进行检测。表中描述了不同样本的处理方法。

 

 

• 结果

 

与Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）相比，Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）在快速和标准循环设置中对所有样本的扩增Ct值都更快。

这说明MDX131对唾液样本中存在的抑制物，包括在提取核酸中残留的抑制物，都具有更强的耐受性能。

 

总 结

这个研究显示通用型抗抑性预混液可以用于唾液样本，但是在反应速度和灵敏度上都不如专门针对唾液样本的预混液。

Air-Dryable™ 可风干唾液直扩RT-qPCR预混液（MDX131）和Air-Dryable™ 可风干一步法RT-qPCR预混液（MDX095）在快速反应条件下性能都优于通用型的抗抑性预混液，但是MDX131对提取的RNA或人体唾液粗裂解液的扩增要比 MDX095更好。唾液直扩预混液MDX131专门针对唾液样本中特殊存在的抑制物而优化。因为提取核酸中也有少量抑制物残留，而唾液直扩qPCR预混液对这些抑制物具有更强的耐受性能，因此即使对于提取的核酸样本，它也比普通的qPCR预混液具有更高的检测灵敏度。迈迪安的唾液直扩qPCR预混液是适用于呼吸道病传染病检测的最优选择，助力分子POC开发，其可冻干的优势还能实现常温储运，满足IVD诊断的快、准、精、便的更多需求！

 

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参考文献

1. To, K.K., et. al. Additional molecular testing of saliva

specimens improves the detection of respiratory viruses.Emerg Microbes Infect. 2017 Jun 7;6(6):e49. doi:10.1038/emi.2017.35.

2. Wang, C., et. al. A New Specimen for Syphilis Diagnosis:Evidence by High Loads of Treponema pallidum DNA in Saliva, Clinical Infectious Diseases. 2021 Nov 1; 73(9), e3250–e3258. doi:10.1093/cid/ciaa1613

3. Valinetz, E. and Cangelosi, G. A Look Inside: Oral Sampling for Detection of Non-oral Infectious Diseases. Journal of Clinical Microbiology. 2021;59(10). doi:10.1128/JCM.02360-20

4. Oberkanins, C., et al. Use of saliva and salivary DNA for

comprehensive genotyping based on RealFast and StripAssays. Ann Transl Med. 2017 Sep;5(Suppl 2):AB079. doi: 10.21037/atm.2017.s079.

Meridian迈迪安致力于提供最高质量的分子原料酶制剂，全球研发生产基地均通过了 ISO 13485认证。我们始终坚持以客户为中心，以高质量的服务和产品为合作伙伴提供价值。

迈迪安产品主要优势包括：

• 一致性：单批次量产，保证可靠的检测

• 优质性能：通过严格质控，减少批间差及污染

 

 

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