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最近小编收到很多用户咨询，如何在免疫检测中使用阻断剂？如何评估阻断剂性能？

 

本文就以迈迪安的TRU Block为例，将阻断剂的正确使用方法和测评过程进行分享，希望能够帮助更多研发人员正确使用阻断剂。

 

检测前注意事项

 

注意事项：

 

1. 在双鼠单抗的夹心法中使用阻断剂去除HAMA干扰。

2. 进行多个阻断剂性能对比时，在同一检测中进行平行测试。

3. 为了获得最佳性能，建议在添加单抗之前先在样本中添加HAMA阻断剂，即先将阻断剂加入到样本稀释液中。如果你的检测不使用样本稀释液，可以将HAMA阻断剂添加到检测稀释液中，然后直接将检测稀释液和样本一起加到反应孔中进行反应。在测流免疫层析检测中，可以将HAMA阻断剂添加到样品垫、样本稀释液或预处理液里，或者直接添加到膜上作为阻断条。

4. 为了量化不同阻断剂或不同阻断剂浓度之间的阻断率差异，最灵敏的方法是检测HAMA样品中未被阻断的HAMA活性（确保OD值在线性可读范围内）。如果未阻断HAMA/RF样本的OD值较高，可以稀释样本，来确保其OD值读数在1-2以内，来确保检测灵敏度。

5. 在评估任一阻断剂（如：TRU Block） 之前，确保检测中使用的任何稀释液或缓冲液中不含任何其他阻断剂成分。

6. 只选择含有已知HAMA、HA和RF干扰的人类血清或血浆样品进行评估。非人体样本（如动物或植物）、粪便、尿液或其他非血液样品不含HAMA，不适合用于HAMA阻断剂的性能评估。当测试阻断剂性能时，了解检测中的干扰是否是由样品中的HAMA、HA或RF引起是最重要的。检测干扰也可能是由非特异性结合或一些其他类型的干扰引起的，因此只有样品中存在已知有HAMA、HA和RF干扰的样品才可用于HAMA阻断剂的评估。

7. 在每次检测中包括阳性对照（无阻断的 HAMA 样品）和阴性对照（仅缓冲液-无 HAMA 样品）。

 

 

阻断剂使用方法

 

使用以下流程图帮助选择正确的阻断剂检测方法

 

 

Protocol A

* 阳性对照=HAMA样品(样品中不含阻断剂)

* 阴性对照=仅缓冲液(无样本/无阻断剂)

 

1.  制备检测缓冲液（不含阻断剂）
2. 使用样本稀释液将阻断剂(Tru Blocker和对比阻断剂)稀释到不同工作浓度
3. 使用含阻断剂的样本稀释液 （来自步骤2）稀释HAMA样本
4. 将稀释的HAMA样品（来自步骤3）加入到反应板孔中
5. 孵育(根据常规检测步骤)
6. 清洗板孔
7. 将发光交联物添加到反应板孔中
8. 孵育(根据常规检测步骤)
9. 清洗板孔
10. 在反应板孔中添加底物
11. 孵育(根据常规检测步骤)
12. 添加反应终止试剂
13. 读取OD值
14. 计算阻断百分比
15. 通过百分比对比阻断剂反应性能

 

Protocol B

* 阳性对照=HAMA样品(样品中不含阻断剂)

* 阴性对照=仅缓冲液(无样本/无阻断剂)

 

1. 制备检测稀释液（不含阻断剂）
2. 使用检测稀释液将阻断剂(Tru Blocker和对比阻断剂)稀释到不同工作浓度
3. 在反应板孔中添加HAMA样品，然后加入含有阻断剂的检测稀释液（来自步骤2）
4. 孵育(根据常规检测步骤)
5. 清洗板孔
6. 在反应板孔中添加底物
7. 孵育(根据常规检测步骤)
8. 添加反应终止试剂
9. 读取OD值
10. 计算阻断百分比
11. 通过百分比对比阻断剂反应性能

 

如何比较阻断剂性能

 

1. 计算阻断百分比

 

 

*比较相同浓度阻断剂的阻断百分比，百分比越高性能越好*比较具有相同阻断百分比时的阻断剂浓度，浓度越低性能越好

2. 比较每种阻断剂可以阻断的HAMA/RF样品数量

 

 

 

迈迪安TRU Block阻断剂

 

迈迪安开发的TRU Block^TM的免疫检测阻断剂是一种全新的HA、HAMA和RF阻断剂。

 

TRU Block含有一种专门的结合剂，可以直接对抗抗体干扰，能够与HA、HAMA和RF高亲和力结合。

 

 

一旦与干扰抗体结合, TRU Block会通过位阻进一步阻止HA与其它试验成分结合。

 

TRU Block的性能优势包括覆盖范围更广，可以阻断所有类型的HA和RF的干扰广，并且可以在低浓度下使用，与小鼠IgG相比具有更好的阻断效果。

 

TRU Block的阻断性能分别通过间接法(图 1)和直接法(图2)双鼠单克隆ELISA检测中进行评估。

 

TRU Block，小鼠IgG和另一种常见的HA阻断剂，分别添加到样本稀释缓冲液中，对比他们的阻断效果。结果表明，在基于ELISA的免疫检测中，TRU Block的阻断性能优于小鼠IgG和其他商用阻断剂。

 

 

图1: 使用双鼠单克隆夹心CA19-9检测来比较TRU BlockTM， 小鼠IgG和竞品HA阻断剂对患者样本(SD386-15)中HAMA干扰的效果。含有TRU Block，小鼠IgG或者竞争阻断剂的阻断液使用同样的稀释缓冲液各制备了三个个不同浓度 (5 μg/ml, 2.5 μg/ml 和1.25 μg/ml)。通过相对抑制HAMA信号(即比较没有阻断剂的样品和有各种阻断剂的样品的吸光度)来决定各种阻断剂的有效性。对比结果显示，TRU Block在不同浓度下的对HAMA的阻断性都更高。

 

图2:使用双鼠单克隆夹心CA-19-9检测来比较TRUBlock， 小鼠IgG，兔IgG和竞品HA阻断剂对患者样本(A12916H)中RF干扰的效果。在不同浓度下 (5 μg/ml, 2.5 μg/ml 和1.25 μg/ml)，通过相对抑制RF信号 (即比较没有阻断剂的样品和有各种阻断剂的样品的吸光度)来决定各种阻断剂的有效性。对比结果显示，TRU Block 在不同浓度下对RF的抑制性都更高，表明其阻断性能更强。

 

TRU Block也已成功用于化学发光检测和侧向流免疫检测中，干燥后用于样品垫和检测抗体之间即可。

 

性能对比– TRU Block vs 竞品

 

为了满足IVD行业可持续发展的需求，迈迪安还研发出了非动物源的免疫阻断剂。 

迈迪安是全球唯*一同时拥有工业化大规模产能的非动物源和动物源主动&被动阻断剂的原料商！欢迎致电咨询！

 

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Meridian迈迪安致力于提供最高质量的分子原料酶制剂，全球研发生产基地均通过了 ISO 13485认证。我们始终坚持以客户为中心，以高质量的服务和产品为合作伙伴提供价值。

迈迪安产品主要优势包括：

• 一致性：单批次量产，保证可靠的检测

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美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体，各种病毒抗原，各种重组蛋白质，各类 PCR 多聚酶，各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。45年以来，迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。