环介导等温扩增技术（Loop-mediated Isothermal Amplification，LAMP）是Notomi等在1998年报道的一种等温核酸扩增技术。该法依赖于识别保守序列DNA的6个特异性片段的4条引物（2条外引物和2条内引物）和一种链置换DNA聚合酶（Bst DNA polymerase）。Bst DNA聚合酶是一种来源于硬脂酸杆菌 (Bacillus stearothermophilus) 的DNA聚合酶I， 具有5’- 3’的DNA聚合酶活性和强链置换活性， 但缺乏5’- 3’的外切酶活性。
LAMP检测体系中基因的扩增和产物的检测可一步完成，扩增效率高，可在30～60min扩增10^9～10^10倍，特异性较高。LAMP技术的主要原理是DNA在65℃左右可以处于动态平衡状态，DNA在此温度下利用4条特异性引物依靠一种链置换DNA聚合酶，使链置换DNA的合成不停地自我循环。


很多临床样本中含有多种浓度的扩增抑制物，如呼吸疾病检测样本中的粘蛋白、粪便样本中的胆盐、血液样本中的血红素和尿液样本中的尿素等。此外，常用样本采集设备中的某些成分(如通用传输介质(UTM)、肝素、福尔马林或含有凝胶或木炭的棉签等)也被认为是会抑制扩增的。阻止抑制物对扩增检测的性能、重复性和灵敏度的影响至关重要。使用一种对抑制物有更强耐受性的酶能极大地提高扩增的成功率，特别是在直接扩增(即免提取DNA的情况下)或样品浓度低时。Bst聚合酶与全新的抗抑性Bst缓冲液一起使用时，显示出更强的抑制剂耐受性和反应特异性。

迈迪安公司最近新推出了一款抗抑性Bst缓冲液(MDX019)， 该产品含有的独特配方可用于粗裂解样本，如唾液、痰液或其他临床样本的免核酸提取环介导等温直接扩增(LAMP)反应。该产品可与迈迪安提供的Bst DNA聚合酶(MDX012)和高浓度无甘油 Bst DNA聚合酶 (MDX018)搭配使用。


 

• 对不同GC含量的靶标有效扩增

在20%痰液样本中对百日咳杆菌(57% GC)、金黄色葡萄球 菌(33% GC)、疱疹病毒(59% GC)和结核杆菌(65% GC)进 行LAMP扩增。结果显示，相较普通Bst缓冲液（蓝色），抗抑性Bst 缓冲液（绿色）扩增效率更高，TTR更快。

• 在有不同浓度抑制物时的高效扩增

分别使用抗抑性Bst缓冲液（绿色）和普通Bst缓冲液（蓝色）对人唾液中的 hBRCA1基因进行LAMP扩增。结果显示，反应中抑制剂浓 度的增高对抗抑性Bst缓冲液的扩增效率没有影响。

• 提高Bst酶的耐受性

对最终浓度含有5%、20%或40%毛滴虫DNA的样本保存液分别使用抗抑性Bst缓冲液（红色）和普通Bst缓冲液（蓝色）进 行LAMP 扩增。结果显示， 相较于普通Bst缓冲液，即使在40%的样本保存液中，抗抑性Bst缓冲液的扩增性能依然很好。

• 特异性更高

使用抗抑性Bst缓冲液(红色)和普通缓 冲液(蓝色)分别对100个DNA拷贝的百 日咳杆菌、金黄色葡萄球菌、疱疹病 毒和结核杆菌进行LAMP扩增。反应 中对阴性对照(NTC)的扩增显示，使 用普通缓冲液总是能显示出阳性扩增 (深蓝色)，经过优化后的抗抑性Bst缓 冲液(棕色) 则没有阳性扩增或者扩增 延迟，说明抗抑性Bst缓冲液更高的特异性。


Bst 反应缓冲液, 10x

• 高耐盐性

LAMP反应分别使用迈迪安公司的Bst DNA聚合酶和 供应商B的Bst，在盐浓度 （KCl）递增的条件下，使用 制造商推荐的方案进行扩增。结果表明，迈迪安的 BstDNA聚合酶对抑制剂的耐受性与供应商B的Bst相同。

• 反应快速

LAMP 反应分别用迈迪安的Bst DNA聚合酶（红色）和供应商A（蓝色）、供应商B（绿色）和供应商C（紫色）的Bst进行LAMP反应，使用各自制造商推荐的方案，扩增不同的靶标。 结果表明，迈迪安公司的Bst DNA聚合酶反应始终比其他Bst更快地达到阈值。

• 高度稳定性

Bst DNA聚合酶(A)置于+4°C、环境温度(室温)或+37°C下4小时(蓝色)、24小时(红色)或1周(黄色)，并在(B)-80°C至0°C之间进行5、20和30轮快速冻融。结果表明，迈迪安的Bst DNA聚合酶是非常稳定的，承受温度高达+37°C的1周，或多达30个冻融周期而不失去活性。MDX018（高浓度无甘油版本）在相同的测试条件下也得到了类似的结果。


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关于迈迪安生物科技

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