基因分型检测（Genotyping）可用于遗传疾病诊断，识别疾病风险因素，并指导治疗决策。单点突变，例如单核苷酸多态性（SNPs），是人类基因组中最常见的遗传变异类型，在个体遗传多样性方面发挥着重要作用。

虽然并非所有的单点突变都会产生功能性后果，但有些突变会显著影响基因功能或蛋白质结构，这反过来会增加/降低个体患癌症等疾病的风险。

在体外诊断中，SNPs检测常用于传染病检测、癌症标志物检测、 对治疗药物耐药的鉴定，无创产前检测及药物基因组学的研究等。

 

常用于SNPs检测的样本包括有血液、唾液、尿液、粪便和FFPE样本。相对比血液或唾液等其他生物样本，尿液通常含有较低浓度的DNA，因此使用尿液样本的基因分型检测可能相对具挑战性。而且尿液中含有PCR抑制物（如尿素、核酸酶等），以及对检测灵敏度的要求，都有可能会影响基因分型检测的成功率。

但是随着基因分型技术的进步，从尿液样本中提取DNA并对其检测分析已可以用于各种诊断应用，包括：

 

• 传染病检测: 例如性传染病，包括HPV分型检测，和尿道感染等

• 癌症标志物检测： 用于诸如膀胱癌等癌症早期检测

• 无创产前检测 (NIPT): 从孕妇尿液中的无细胞胎儿DNA筛查胎儿遗传性异常

• 药物基因组学: 识别影响个体对某些药物反应的基因变异

• 流行病学研究: 用于群体遗传学研究，以深入了解各种特征或疾病的遗传基础

   

Lyo-ready^TM 可冻干基因分型 尿液直扩qPCR预混液

迈迪安推出了全新的Lyo-Ready^TM 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液，其先进的配方能够从尿液样本中超灵敏地扩增SNPs和其他位点突变，并且对样本中可能破坏DNA和抑制PCR反应的尿素和核酸酶具有超强耐受性。此外，该试剂既能用于液体体系也能通过冻干用于开发常温稳定的检测，是用于POC设备的理想选择。

 

Lyo-Ready^TM 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液结合了先进的化学缓冲液配方、PCR增强剂和优化的抗体热启动聚合酶，可以直接在尿液样本（或运输保存液）存在PCR抑制物的情况下，实现快速、精确并且可重复的SNP检测，获得卓越的等位基因鉴别和集群分布。

 产品亮点

• 超灵敏：可直接从FFPE粗处理样本中检测低至1拷贝靶标

• 抗抑性：对尿液样本中的抑制物（如尿素、核酸酶）和运输保存液中的抑制物（如阴道拭子的UTM）具有超强耐受性

• 特异性：紧密的荧光簇，可清晰地区分等位基因，非常适合困难的SNP

• 可冻干：可用于液体体系或冻干使用，是高通量或POC检测的理想选择

 

性能数据 

以下测试主要针对其在HPV及癌症相关基因突变检测中的性能进行对比检测，此外还检测了其灵敏度及冻干稳定性。所有检测均针对尿液或UTM样本的直接扩增（无核酸提取步骤），反应条件如下：

对HPV -16型的突变检测

HPV有多种类型，其中HPV 16型和18型属于高危型病毒之一，与宫颈癌、膀胱癌的发生密切相关 ，是十几种高危型里面致癌能力最强的类型。

研究发现，HPV 16型病毒 的E6-T350G突变可能与宫颈癌和口咽癌细胞的增殖有关¹。

分别使用 A) Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液 (MDX158), B/ KAPA Probe Force qPCR Mix (Roche), C) TaqPath™ ProAmp™ Multiplex Master Mix (ThermoFisher) 和 D) Type-it Fast SNP Probe PCR Kits (Qiagen) 对40% UTM样本中的人乳头瘤病毒（HPV）16型 E6-T350G突变进行检测。等位基因G（蓝色）和 等位基因T（红色）的纯合样本，等位基因G/T的杂合样本（绿色），与NTC（黑色）进行比对，图中x表示未确定。

结果显示，与对比试剂相比，Lyo-Ready^TM 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液对UTM样本的直接检测具有更紧密的集群分布，对临床相关的突变位点具有更准确的分辨。

 

对10%人体尿液中胰腺癌相关的KRAS-G12D突变检测 约35%的胰腺癌患者体内出现KRAS-G12D的突变。通过小鼠实验研究，目前已经确定了一种有效的实验药物，该药物可以直接靶向作用于具有这种突变的胰腺肿瘤²。

分别使用 A) Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液, B/ Kapa Probe Force, C/ TaqPath™ 和D/ Type-it Fast Kits对10%人体尿液样本中胰腺癌癌症细胞系SU.86.86的胰腺癌相关的KRAS-G12D 突变DNA（SNP编码：rs121913529) 进行检测。等位基因A（蓝色）和 等位基因G（红色）的纯合样本，等位基因A/G的杂合样本（绿色），与NTC（黑色）进行比对，图中x表示未确定。

结果显示，与对比试剂相比，Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液对人体尿液样本中癌症相关的SNPs具有更准确的鉴别。

 对20%人体尿液样本中宫颈癌相关的p53突变检测 根据Meta分析显示，p53 rs1042522 C>G 突变可增加宫颈癌风险³。

分别使用 A) Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液, B/ Kapa Probe Force, C/ TaqPath™ 和D/ Type-it Fast Kits对20%人体尿液样本中宫颈癌相关的p53突变（SNP编码：rs1042522) 进行检测。等位基因G（蓝色）和 等位基因C（红色）的纯合样本，等位基因C/G的杂合样本（绿色），与NTC（黑色）进行比对，图中x表示未确定。

结果显示，与对比试剂相比，Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液对20%尿液样本中的p53突变具有更准确的等位基因分辨。
 

对30%人体尿液样本中膀胱癌相关的PAI1突变检测 膀胱癌是最常见的癌症之一，具有较高的复发率。最近的研究表明SNP rs7242使纤溶酶原激活物抑制剂-1（PAI1）的抗凋亡作用升高，导致更高的膀胱癌复发风险⁴。

分别使用 A) Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液, B/ Kapa Probe Force, C/ TaqPath™ 和D/ Type-it Fast Kits对30%人体尿液样本中膀胱癌相关的PAI1突变（SNP编码：rs7242) 进行检测。等位基因G（蓝色）和 等位基因T（红色）的纯合样本，等位基因G/T的杂合样本（绿色），与NTC（黑色）进行比对，图中x表示未确定。

结果显示，与对比试剂相比，Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液对30%尿液样本中的PAI1突变具有更准确的等位基因分辨。
 

超高灵敏度和可重复性 

使用Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液对10%人体尿液样本中10倍连续稀释的合成DNA进行qPCR检测（分别为10000、1000、100、10和1个拷贝）。结果显示，Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液在有PCR抑制物存在时，对低拷贝和高拷贝DNA模板的检测依然具有超高的灵敏度和可重现性。

 冻干后可常温保存12个月以上 

Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液冻干后在37°C下保存1个月后（红色）进行稳定性检测，将其复溶后与新鲜配置的液体体系（蓝色）进行对比,对10%人体尿液进行直接检测。冻干后的试剂与新鲜液体体系具有A) 相同性能 ，以及B)相同的等位基因分辨能力 （等位基因AA（红色）和等位基因CC（蓝色）为纯合样本，等位基因A/C为杂合样本（绿色），与NTC（黑色）进行比对，图中x表示未确定） 。结果显示，Lyo-Ready™ 可冻干基因分型尿液直扩qPCR预混液冻干后常温下储存稳定性超过18个月以上。  产品信息 

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SNP精选

1、基于PCR的SNP检测技术解析

2、血液样本基因分型

3、FFPE样本基因分型
 

参考文献：

1. Kottaridi, C., et al. The T350G Variation of Human Papillomavirus 16 E6 Gene Prevails in Oropharyngeal Cancer from a Small Cohort of Greek Patients. Viruses 2022 14:1724. doi: 10.3390/v14081724

2. Kemp, S.B., et al. Efficacy of a Small-Molecule Inhibitor of KrasG12D in Immunocompetent Models of Pancreatic Cancer. Cancer Discov.2023 13(2):298-311. doi: 10.1158/2159-8290.CD-22-1066.

3. Yu M., et al. Associations of MDM2 rs2279744 and TP53 rs1042522 polymorphisms with cervical cancer risk: A meta-analysis and systematic review.Front Oncol, 2022 12, 973077. doi: 10.3389/fonc.2022.973077.

4. Murakami K., et al. Association of SNPs in the PAI1 Gene with Disease Recurrence and Clinical Outcome in Bladder Cancer. Int J Mol Sci.2023 24(5):4943. doi: 10.3390/ijms24054943

RANSON B M. HIV diagnostics：current recommendations and opportunities for improvement[J]. Infect Dis Clin North Am，2019，33（3）：611-628.

 

迈迪安的所有产品都可以提供商业大规模生产，符合ISO13485标准，并大量用于全球各种获得认证的商用检测中。
 

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美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体，各种病毒抗原，各种重组蛋白质，各类 PCR 多聚酶，各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。45年以来，迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。