逆转录（Reverse Transcription）是以RNA为模板，在逆转录酶的催化作用下，合成RNA/DNA杂合双链，然后水解杂合双链中的RNA，得到互补的单链cDNA的过程。得到的cDNA单链可以作为扩增模板，合成双链DNA。cDNA的合成可以用于后续的PCR实验、qPCR实验、基因检测、基因工程等各个领域。 

逆转录PCR(RT-PCR )是先从 RNA 反转录得到 cDNA，然后再用PCR进行定量分析，具有灵敏性高、操作简单等优点，广泛应用于如传染病细菌和病毒病原体检测、动物病原体检测、癌症标志物检测、食品安全监测等等。


不同的mRNA转录成cDNA的效率不同，适合某一种mRNA转录的条件可能对另一种mRNA不适合，因此，在进行不均一mRNA反转录时，下面的参数非常重要。




一般来说MMLV是最常用的逆转录酶，它分为野生型和突变型：




迈迪安提供的是MMLV 逆转录酶，包含野生型（MDX044 &043）和突变型(MDX042 &117)。其中MDX117是热稳定型MMLV， 耐受温度最高可达60度。




一般来说，Oligo dT （BIO-38029）因为其可获得mRNA的全长拷贝，应用范围广泛；如果mRNA长度过长>4kb，或者没有polyA尾（原核mRNA或rRNA），建议是选择使用随机引物 (BIO-38028)；最后一个基因特异性引物适用于目的序列已知的情况，仅扩增特定cDNA片段，通常在一步RT-PCR法中使用。当前，Oligo-dT引物和随机引物的混合常是逆转录过程中最佳的选择。



一般来说，RT-qPCR用于诊断检测中最重要的两个指标是灵敏度和特异性，下文针对这两个方面的主要优化方法进行了汇总。




适当提高逆转录酶的用量可以提高逆转录的灵敏度，但是过量的逆转录酶也会对Taq聚合酶产生抑制作用。因此，在优化的时候，建议对逆转录酶的用量进行梯度测试，来选取反应需要的最优浓度。

迈迪安生物科技提供各种开发高灵敏、高特异的RT-qPCR检测所需的组分和优化的预混液配方，本文中所有提到的相关试剂整理如下,欢迎联系我们订购样品测试：




 

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