ToRCH筛查共识及试剂研发原料筛选方案

中国是新生儿出生缺陷高发国家，每年出生的缺陷儿占全球的五分之一。随着二胎政策的开放，越来越多的家庭加入到二胎行列。提高人口质量，优生优育显得非常重要，全面进行孕前、产前检查，对于降低出生缺陷、提高人口素质、确保母婴安全具有重要的意义。为了有效贯彻落实优生优育政策，在孕前进行ToRCH检查是一个重要的项目。

“ToRCH”一词最早是由美国埃默里大学 (Emory University)免疫学家Andre Nahmia于1971年提出，如图1所示，ToRCH是由几种病原体首字母的缩写组成，孕妇感染后可通过胎盘垂直传播，引起胎儿宫内感染，或通过产道感染新生儿，最终造成胎儿死亡或先天缺陷。

ToRCH包括弓形虫 (Toxoplasma gondii, Toxo)、风疹病毒 (Rubella virus, RV)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)、单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus, HSV)，及其它病原体 (others, o)：如梅毒螺旋体 (Treponema pallidum, TP)、带状疱疹病毒 (Varicella-zoster virus, VZV)、微小病毒B19 (Human parvovirus B19, HPV B19)等。

ToRCH感染后孕妇一般无症状或症状很轻，但如果母亲是孕早期 (怀孕前3个月)感染，并且是初次/原发感染 (Primary infection)，其造成流产或出生缺陷的危险性远远高于二次感染 (Reinfections)和复发感染 (Recurrent infections)。因此TORCH临床诊断筛查的核心为明确孕前免疫状况、孕期母胎是否感染、何时感染、胎儿是否受到损害，以及是否能继续妊娠等。由图2可知，ToRCH各病原体感染后，体内产生的IgM和IgG抗体的含量，随着时间的变化而变化，因此不同时期定量检测抗体的变化程度，可以辅助判断ToRCH的感染时期、免疫状态及危害。

市场上ToRCH感染筛查的方式，通常包括检测IgG和IgM抗体。在多数情况下，IgG抗体阳性而IgM抗体阴性，表示感染发生在过去；而IgM抗体阳性而IgG抗体阴性，则表示近期感染。如图 3所示，目前中国市场有ToRCH检测试剂，且获得了NMPA注册证书的国内外主要厂家仅12家，ToRCH检测产品的国内外市场空间巨大。

目前临床应用中，酶联免疫法和化学发光法，为国内外ToRCH检测的主流技术。ToRCH IgM试剂的检测模式通常为捕获法，或捕获夹心法：固相包被抗人IgM抗体，捕获人样本中的所有人IgM，然后ToRCH抗原特异性的人IgM抗体，与ToRCH抗原-酶标结合 (捕获法)，或与“ToRCH抗原＋抗ToRCH抗原的单抗-酶标”结合 (捕获夹心法)；ToRCH IgG试剂的检测模式通常为“间接法”：固相包被ToRCH抗原，捕获ToRCH抗原特异性的人IgG和IgM抗体，然后抗人IgG抗体-酶标与ToRCH抗原特异性的人IgG结合。ToRCH IgG抗体检测之所以不使用捕获法，是因为人IgG为人血清中含量最高的免疫球蛋白，占血清总抗体的75%~ 80%，若固相包被抗人IgG单抗捕获所有的人IgG的话，会增加固相和抗人IgG单抗的用量，同时也会增加ToRCH抗原与其特异性抗体结合的难度。

迈迪安生物科技 (Meridian Life Science)是拥有43年历史，且纳斯达克上市 (代号 VIVO) 的美国公司，是一家大规模生产各种抗体、天然病毒抗原、重组抗原、PCR多聚酶、核苷酸和其它试剂关键原材料的大型领军企业。迈迪安抗原、抗体和阻断剂等免疫诊断原料，其产品涵盖适用于150多种疾病。 ToRCH IgM和IgG检测，需要用到抗人IgM和抗人IgG抗体，迈迪安可提供相应的抗体，及IgG吸收剂和固相封闭液：
 

• 弓形虫Toxoplasma

成年人Toxo感染后的症状很隐匿，初次感染Toxo后，仅10%~ 20%出现临床症状。孕妇感染Toxo的常见途径为吃未煮熟的肉食，以及接触过携带弓形虫的猫。胎儿感染Toxo几乎都是由孕妇的原发感染所致，因为孕前血清学检测Toxo IgG阳性，则提示感染过Toxo，孕妇将终身免疫，胎儿患先天性Toxo病的概率很小。

在Toxo检测试剂抗原筛选方面，目前国内外大多数厂家均使用Toxo天然抗原。使用Toxo天然抗原的优势为可检测出，针对Toxo表面抗原、棒状体抗原、致密颗粒抗原和微线体抗原等所有蛋白的特异性抗体，阳性符合率高；但由于天然抗原的成分复杂，与人样本中的抗体，存在更高概率的非特异性结合，从而降低阴性符合率。选用几种不同重组抗原的组合，或嵌合抗原，如免疫原性较强的Toxo表面抗原P30和P22，加上致密颗粒抗原P35，可以提高Toxo检测的阳性符合率。使用重组抗原替代天然抗原，是免疫诊断试剂抗原筛选的大势所趋。迈迪安公司提供Toxo检测用抗原和抗体原材料：

• 风疹 Rubella

我国育龄妇女总体RV IgG的血清阳性率约为58%，在孕11周前发生的RV宫内感染所致胎儿出生缺陷率高达90%，只有约4.6%的妇女接种了RV疫苗，提示约40%的育龄妇女易感染RV，因此建议所有计划妊娠的妇女均行RV血清学IgG和IgM筛查。
在RV检测试剂抗原筛选方面，除了罗氏使用E1重组抗原以外，雅培、西门子、索灵和贝克曼等国外厂家均使用RV病毒裂解物。迈迪安公司提供RV检测用抗原和抗体原材料：

• 巨细胞病毒Cytomegalovirus

CMV是导致胎儿先天感染和畸形的最常见病毒，是感音神经性听觉丧失和精神发育迟滞的常见原因之一。目前我国成人CMV IgG阳性率在90%以上，育龄妇女中CMV易感者占5%~ 10%。孕期CMV原发感染率为0.7%~4%，而宫内垂直传播和胎儿感染的风险高达30%~40%。

在CMV检测试剂抗原筛选方面，国内外大多数厂家均广泛使用重组抗原。主要重组抗原的介绍如下：pp150为免疫原性最强且持续时间长的CMV被膜磷酸蛋白，在病毒的潜伏和再激活期均可被检出；pp52为CMV主要的DNA结合蛋白，非结构的核磷酸蛋白，被看作是病毒感染后的早期标志物；pp65是构成病毒颗粒外结构的磷酸蛋白，针对pp65的抗体应答是检测病毒早期感染的标志。

迈迪安公司提供CMV检测用抗原和抗体原材料：

• 单纯疱疹病毒Herpes Simplex Virus

HSV是一种嗜神经的疱疹病毒，一经感染、终身携带。我国成人HSV IgG抗体阳性率约95%，既可以是HSV-1型既往感染导致 (约占70%~80%)，也可以是HSV-2型既往感染导致 (约占 20%~30%)。孕早、中期发生HSV初次感染，造成胎儿感染的概率极低，孕早期筛查意义不大。HSV通过胎盘垂直传播，导致胎儿畸形的情况很罕见；HSV感染主要是接触产妇生殖道病毒，从而感染新生儿。
在HSV检测试剂抗原筛选方面，罗氏、索灵和伯乐等国外大多数厂家，均使用重组抗原。由于HSV-1和HSV-2之间高度的遗传相似性，大多数HSV特异性抗体存在交叉反应，但由于发现了可区分HSV包膜糖蛋白GG-1型和GG-2型的重组抗原，使可用于区分HSV-1和HSV-2感染的免疫诊断试剂成为可能。

迈迪安公司提供HSV检测用抗原和抗体原材料：


除以上ToRCH筛查项目以外，其他儿科相关传染疾病，例如腮腺炎、麻疹、轮状病毒、呼吸道合胞病毒等， 迈迪安也有相关优质的抗原抗体提供。

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在使用免疫检测，比如ELISA，CLIA或者侧向流免疫检测中，特别需要注意的是，嗜异抗体(HA)，人抗鼠抗体(HAMA)和类风湿因子(RH)会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性。 因此，非常有必要使用专门的免疫阻断剂来降低干扰引起的假阳性结果，从而提高检测结果的准确性。

理想的免疫阻断剂需要具有以下特征:
• 有效地阻断试验反应物与微孔表面的非特异性结合
• 不会破坏已吸附到微孔的试验成分的结合
• 充当固相上试验反应物的稳定剂（防止变性作用）
• 不与其它试验反应物发生交叉反应
• 不具备可能导致底物信号产生或反应物降解的酶活性
• 各批次间性能如一
迈迪安的阻断剂系列包括主动阻断剂，如TRU Block™， 和被动阻断剂，如小鼠IgG。其中TRU Block™ULTRA(新一代HAMA阻断剂)是经过多年研发目前市面上最强大的免疫分析干扰阻断剂。它可以在侧向引流和ELISA检测中全面抗HAMA, HA和RF的干扰。IVD制造商能够在较低浓度下使用这种主动阻断剂，并实现更高的检测性能。

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关于迈迪安生物科技

美国迈迪安生物科技是一家大规模生产各种抗体，各种病毒抗原，各种重组蛋白质，各类PCR多聚酶，各种核苷酸和体外诊断关键试剂的大型领军企业。40年以来，迈迪安生命科学公司始终坚持以提供创新的生命科学解决方案和建立值得信赖的合作伙伴关系为我们的宗旨。我们的重点是为体外诊断试剂公司提供优质的原料和服务，使其有助于推动这些领域的发展。