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ToRCH筛查共识及试剂研发原料筛选方案
人阅读 发布时间:2021-05-04 11:29
中国是新生儿出生缺陷高发国家,每年出生的缺陷儿占全球的五分之一。随着二胎政策的开放,越来越多的家庭加入到二胎行列。提高人口质量,优生优育显得非常重要,全面进行孕前、产前检查,对于降低出生缺陷、提高人口素质、确保母婴安全具有重要的意义。为了有效贯彻落实优生优育政策,在孕前进行ToRCH检查是一个重要的项目。
“ToRCH”一词最早是由美国埃默里大学 (Emory University)免疫学家Andre Nahmia于1971年提出,如图1所示,ToRCH是由几种病原体首字母的缩写组成,孕妇感染后可通过胎盘垂直传播,引起胎儿宫内感染,或通过产道感染新生儿,最终造成胎儿死亡或先天缺陷。
ToRCH包括弓形虫 (Toxoplasma gondii, Toxo)、风疹病毒 (Rubella virus, RV)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)、单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus, HSV),及其它病原体 (others, o):如梅毒螺旋体 (Treponema pallidum, TP)、带状疱疹病毒 (Varicella-zoster virus, VZV)、微小病毒B19 (Human parvovirus B19, HPV B19)等。
图1 ToRCH及其对胎儿的危害
ToRCH感染后孕妇一般无症状或症状很轻,但如果母亲是孕早期 (怀孕前3个月)感染,并且是初次/原发感染 (Primary infection),其造成流产或出生缺陷的危险性远远高于二次感染 (Reinfections)和复发感染 (Recurrent infections)。因此TORCH临床诊断筛查的核心为明确孕前免疫状况、孕期母胎是否感染、何时感染、胎儿是否受到损害,以及是否能继续妊娠等。由图2可知,ToRCH各病原体感染后,体内产生的IgM和IgG抗体的含量,随着时间的变化而变化,因此不同时期定量检测抗体的变化程度,可以辅助判断ToRCH的感染时期、免疫状态及危害。
图 2 ToRCH IgM和IgG抗体血清学转化趋势图
市场上ToRCH感染筛查的方式,通常包括检测IgG和IgM抗体。在多数情况下,IgG抗体阳性而IgM抗体阴性,表示感染发生在过去;而IgM抗体阳性而IgG抗体阴性,则表示近期感染。如图 3所示,目前中国市场有ToRCH检测试剂,且获得了NMPA注册证书的国内外主要厂家仅12家,ToRCH检测产品的国内外市场空间巨大。
图 3 中国ToRCH试剂主要厂家及检测技术
目前临床应用中,酶联免疫法和化学发光法,为国内外ToRCH检测的主流技术。ToRCH IgM试剂的检测模式通常为捕获法,或捕获夹心法:固相包被抗人IgM抗体,捕获人样本中的所有人IgM,然后ToRCH抗原特异性的人IgM抗体,与ToRCH抗原-酶标结合 (捕获法),或与“ToRCH抗原+抗ToRCH抗原的单抗-酶标”结合 (捕获夹心法);ToRCH IgG试剂的检测模式通常为“间接法”:固相包被ToRCH抗原,捕获ToRCH抗原特异性的人IgG和IgM抗体,然后抗人IgG抗体-酶标与ToRCH抗原特异性的人IgG结合。ToRCH IgG抗体检测之所以不使用捕获法,是因为人IgG为人血清中含量最高的免疫球蛋白,占血清总抗体的75%~ 80%,若固相包被抗人IgG单抗捕获所有的人IgG的话,会增加固相和抗人IgG单抗的用量,同时也会增加ToRCH抗原与其特异性抗体结合的难度。
迈迪安生物科技 (Meridian Life Science)是拥有43年历史,且纳斯达克上市 (代号 VIVO) 的美国公司,是一家大规模生产各种抗体、天然病毒抗原、重组抗原、PCR多聚酶、核苷酸和其它试剂关键原材料的大型领军企业。迈迪安抗原、抗体和阻断剂等免疫诊断原料,其产品涵盖适用于150多种疾病。 ToRCH IgM和IgG检测,需要用到抗人IgM和抗人IgG抗体,迈迪安可提供相应的抗体,及IgG吸收剂和固相封闭液:
图 4 迈迪安山羊抗人IgG抗体和固相封闭液的通用使用流程
在Toxo检测试剂抗原筛选方面,目前国内外大多数厂家均使用Toxo天然抗原。使用Toxo天然抗原的优势为可检测出,针对Toxo表面抗原、棒状体抗原、致密颗粒抗原和微线体抗原等所有蛋白的特异性抗体,阳性符合率高;但由于天然抗原的成分复杂,与人样本中的抗体,存在更高概率的非特异性结合,从而降低阴性符合率。选用几种不同重组抗原的组合,或嵌合抗原,如免疫原性较强的Toxo表面抗原P30和P22,加上致密颗粒抗原P35,可以提高Toxo检测的阳性符合率。使用重组抗原替代天然抗原,是免疫诊断试剂抗原筛选的大势所趋。迈迪安公司提供Toxo检测用抗原和抗体原材料:
在RV检测试剂抗原筛选方面,除了罗氏使用E1重组抗原以外,雅培、西门子、索灵和贝克曼等国外厂家均使用RV病毒裂解物。迈迪安公司提供RV检测用抗原和抗体原材料:
在CMV检测试剂抗原筛选方面,国内外大多数厂家均广泛使用重组抗原。主要重组抗原的介绍如下:pp150为免疫原性最强且持续时间长的CMV被膜磷酸蛋白,在病毒的潜伏和再激活期均可被检出;pp52为CMV主要的DNA结合蛋白,非结构的核磷酸蛋白,被看作是病毒感染后的早期标志物;pp65是构成病毒颗粒外结构的磷酸蛋白,针对pp65的抗体应答是检测病毒早期感染的标志。
迈迪安公司提供CMV检测用抗原和抗体原材料:
在HSV检测试剂抗原筛选方面,罗氏、索灵和伯乐等国外大多数厂家,均使用重组抗原。由于HSV-1和HSV-2之间高度的遗传相似性,大多数HSV特异性抗体存在交叉反应,但由于发现了可区分HSV包膜糖蛋白GG-1型和GG-2型的重组抗原,使可用于区分HSV-1和HSV-2感染的免疫诊断试剂成为可能。
迈迪安公司提供HSV检测用抗原和抗体原材料:
除以上ToRCH筛查项目以外,其他儿科相关传染疾病,例如腮腺炎、麻疹、轮状病毒、呼吸道合胞病毒等, 迈迪安也有相关优质的抗原抗体提供。邮箱:info.cn@meridianlifescience.com
免疫检测中的干扰
在使用免疫检测,比如ELISA,CLIA或者侧向流免疫检测中,特别需要注意的是,嗜异抗体(HA),人抗鼠抗体(HAMA)和类风湿因子(RH)会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性。 因此,非常有必要使用专门的免疫阻断剂来降低干扰引起的假阳性结果,从而提高检测结果的准确性。
理想的免疫阻断剂需要具有以下特征:
• 有效地阻断试验反应物与微孔表面的非特异性结合
• 不会破坏已吸附到微孔的试验成分的结合
• 充当固相上试验反应物的稳定剂(防止变性作用)
• 不与其它试验反应物发生交叉反应
• 不具备可能导致底物信号产生或反应物降解的酶活性
• 各批次间性能如一
迈迪安的阻断剂系列包括主动阻断剂,如TRU Block™, 和被动阻断剂,如小鼠IgG。其中TRU Block™ULTRA(新一代HAMA阻断剂)是经过多年研发目前市面上最强大的免疫分析干扰阻断剂。它可以在侧向引流和ELISA检测中全面抗HAMA, HA和RF的干扰。IVD制造商能够在较低浓度下使用这种主动阻断剂,并实现更高的检测性能。
您可直接联系我们,我们期待了解您的需求与各企业展开深入合作,为中国诊断企业走向世界作出贡献:
“ToRCH”一词最早是由美国埃默里大学 (Emory University)免疫学家Andre Nahmia于1971年提出,如图1所示,ToRCH是由几种病原体首字母的缩写组成,孕妇感染后可通过胎盘垂直传播,引起胎儿宫内感染,或通过产道感染新生儿,最终造成胎儿死亡或先天缺陷。
ToRCH包括弓形虫 (Toxoplasma gondii, Toxo)、风疹病毒 (Rubella virus, RV)、巨细胞病毒(Cytomegalovirus, CMV)、单纯疱疹病毒 (Herpes simplex virus, HSV),及其它病原体 (others, o):如梅毒螺旋体 (Treponema pallidum, TP)、带状疱疹病毒 (Varicella-zoster virus, VZV)、微小病毒B19 (Human parvovirus B19, HPV B19)等。
图1 ToRCH及其对胎儿的危害
ToRCH感染后孕妇一般无症状或症状很轻,但如果母亲是孕早期 (怀孕前3个月)感染,并且是初次/原发感染 (Primary infection),其造成流产或出生缺陷的危险性远远高于二次感染 (Reinfections)和复发感染 (Recurrent infections)。因此TORCH临床诊断筛查的核心为明确孕前免疫状况、孕期母胎是否感染、何时感染、胎儿是否受到损害,以及是否能继续妊娠等。由图2可知,ToRCH各病原体感染后,体内产生的IgM和IgG抗体的含量,随着时间的变化而变化,因此不同时期定量检测抗体的变化程度,可以辅助判断ToRCH的感染时期、免疫状态及危害。
图 2 ToRCH IgM和IgG抗体血清学转化趋势图
市场上ToRCH感染筛查的方式,通常包括检测IgG和IgM抗体。在多数情况下,IgG抗体阳性而IgM抗体阴性,表示感染发生在过去;而IgM抗体阳性而IgG抗体阴性,则表示近期感染。如图 3所示,目前中国市场有ToRCH检测试剂,且获得了NMPA注册证书的国内外主要厂家仅12家,ToRCH检测产品的国内外市场空间巨大。
图 3 中国ToRCH试剂主要厂家及检测技术
目前临床应用中,酶联免疫法和化学发光法,为国内外ToRCH检测的主流技术。ToRCH IgM试剂的检测模式通常为捕获法,或捕获夹心法:固相包被抗人IgM抗体,捕获人样本中的所有人IgM,然后ToRCH抗原特异性的人IgM抗体,与ToRCH抗原-酶标结合 (捕获法),或与“ToRCH抗原+抗ToRCH抗原的单抗-酶标”结合 (捕获夹心法);ToRCH IgG试剂的检测模式通常为“间接法”:固相包被ToRCH抗原,捕获ToRCH抗原特异性的人IgG和IgM抗体,然后抗人IgG抗体-酶标与ToRCH抗原特异性的人IgG结合。ToRCH IgG抗体检测之所以不使用捕获法,是因为人IgG为人血清中含量最高的免疫球蛋白,占血清总抗体的75%~ 80%,若固相包被抗人IgG单抗捕获所有的人IgG的话,会增加固相和抗人IgG单抗的用量,同时也会增加ToRCH抗原与其特异性抗体结合的难度。
迈迪安生物科技 (Meridian Life Science)是拥有43年历史,且纳斯达克上市 (代号 VIVO) 的美国公司,是一家大规模生产各种抗体、天然病毒抗原、重组抗原、PCR多聚酶、核苷酸和其它试剂关键原材料的大型领军企业。迈迪安抗原、抗体和阻断剂等免疫诊断原料,其产品涵盖适用于150多种疾病。 ToRCH IgM和IgG检测,需要用到抗人IgM和抗人IgG抗体,迈迪安可提供相应的抗体,及IgG吸收剂和固相封闭液:
图 4 迈迪安山羊抗人IgG抗体和固相封闭液的通用使用流程
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弓形虫Toxoplasma
在Toxo检测试剂抗原筛选方面,目前国内外大多数厂家均使用Toxo天然抗原。使用Toxo天然抗原的优势为可检测出,针对Toxo表面抗原、棒状体抗原、致密颗粒抗原和微线体抗原等所有蛋白的特异性抗体,阳性符合率高;但由于天然抗原的成分复杂,与人样本中的抗体,存在更高概率的非特异性结合,从而降低阴性符合率。选用几种不同重组抗原的组合,或嵌合抗原,如免疫原性较强的Toxo表面抗原P30和P22,加上致密颗粒抗原P35,可以提高Toxo检测的阳性符合率。使用重组抗原替代天然抗原,是免疫诊断试剂抗原筛选的大势所趋。迈迪安公司提供Toxo检测用抗原和抗体原材料:
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风疹 Rubella
在RV检测试剂抗原筛选方面,除了罗氏使用E1重组抗原以外,雅培、西门子、索灵和贝克曼等国外厂家均使用RV病毒裂解物。迈迪安公司提供RV检测用抗原和抗体原材料:
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巨细胞病毒Cytomegalovirus
在CMV检测试剂抗原筛选方面,国内外大多数厂家均广泛使用重组抗原。主要重组抗原的介绍如下:pp150为免疫原性最强且持续时间长的CMV被膜磷酸蛋白,在病毒的潜伏和再激活期均可被检出;pp52为CMV主要的DNA结合蛋白,非结构的核磷酸蛋白,被看作是病毒感染后的早期标志物;pp65是构成病毒颗粒外结构的磷酸蛋白,针对pp65的抗体应答是检测病毒早期感染的标志。
迈迪安公司提供CMV检测用抗原和抗体原材料:
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单纯疱疹病毒Herpes Simplex Virus
在HSV检测试剂抗原筛选方面,罗氏、索灵和伯乐等国外大多数厂家,均使用重组抗原。由于HSV-1和HSV-2之间高度的遗传相似性,大多数HSV特异性抗体存在交叉反应,但由于发现了可区分HSV包膜糖蛋白GG-1型和GG-2型的重组抗原,使可用于区分HSV-1和HSV-2感染的免疫诊断试剂成为可能。
迈迪安公司提供HSV检测用抗原和抗体原材料:
除以上ToRCH筛查项目以外,其他儿科相关传染疾病,例如腮腺炎、麻疹、轮状病毒、呼吸道合胞病毒等, 迈迪安也有相关优质的抗原抗体提供。
点击此处可下载优生优育ToRCH及其他相关原料全介绍
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电话:010-85233176
邮箱:info.cn@meridianlifescience.com
免疫检测中的干扰
在使用免疫检测,比如ELISA,CLIA或者侧向流免疫检测中,特别需要注意的是,嗜异抗体(HA),人抗鼠抗体(HAMA)和类风湿因子(RH)会通过与抗体的非特异性结合而降低检测的灵敏度和特异性。 因此,非常有必要使用专门的免疫阻断剂来降低干扰引起的假阳性结果,从而提高检测结果的准确性。
理想的免疫阻断剂需要具有以下特征:
• 有效地阻断试验反应物与微孔表面的非特异性结合
• 不会破坏已吸附到微孔的试验成分的结合
• 充当固相上试验反应物的稳定剂(防止变性作用)
• 不与其它试验反应物发生交叉反应
• 不具备可能导致底物信号产生或反应物降解的酶活性
• 各批次间性能如一
迈迪安的阻断剂系列包括主动阻断剂,如TRU Block™, 和被动阻断剂,如小鼠IgG。其中TRU Block™ULTRA(新一代HAMA阻断剂)是经过多年研发目前市面上最强大的免疫分析干扰阻断剂。它可以在侧向引流和ELISA检测中全面抗HAMA, HA和RF的干扰。IVD制造商能够在较低浓度下使用这种主动阻断剂,并实现更高的检测性能。
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